Etude structure-fonction du facteur de transcription-réparation TFIIH

TFIIH est un facteur de transcription/réparation de l'ADN. Il est compose de 9 sous-unités et organise en deux sous complexes: le core-TFIIH et le CAK. Dans le cadre de cette thèse, nous avons mené une étude structure-fonction du core-TFIIH. Nous avons mis en place un protocole de purification base sur l'affinité au peptide Flag pour étudier l'architecture du core-TFIIH. Ce système a été utilisé pour montrer que p52 interagit directement avec XPB, conditionnant son ancrage au core-TFIIH, et régulant ainsi son rôle dans la transcription et dans la réparation d'ADN. L'étude de la sous-unité p62 a montre une organisation en 3 domaines dont deux ont été caractérisés par protéolyse ménagée et spectrométrie de masse. La Structure du domaine N-terminal, résolue par RMN, a révélée un repliement de type PTB/PH dont le rôle dans la réparation par excision resynthèse de nucléotides et dans une interaction spécifique avec l'endonucléase XPG a été assigné. Le domaine médian contient un motif conservé de type FWxxΦΦ. Par ailleurs, des cristaux de p34/p44 ont été obtenus et une étude en solution et en microscopie électronique a permit de montrer que TFIIE est un dimer.